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非洲豬瘟病毒核酸檢測實操整體方案推薦(1)
◆ 非洲豬瘟ASF的由來:非洲豬瘟(African suwinefever,ASF)是由非洲豬瘟病毒感染家豬和野豬后產(chǎn)生的一種烈性傳染病。此次疫情來勢迅猛,從2018年8月首次傳入我國后便飛速席卷養(yǎng)豬業(yè),帶來了不可預(yù)估的經(jīng)濟損失。非洲瘟病毒是一種具有囊膜結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA病毒,感染家豬和野豬后引起高熱出血和死亡。目前PCR方法被指定用于非洲豬瘟病毒的檢測,其具有高靈敏度、高特異性、快速的特點。
在此,通過實際的案例,與大家分享合作公司組合的高效靠譜的非洲豬瘟病毒檢測方案。
◆ 非洲豬瘟感染組織樣本的前處理:
非洲豬瘟的易感對象是家豬、野豬,通常采集的樣本為血漿和組織。對于組織樣本來說,在核酸提取前需要進行充分研磨破碎,保證核酸充分釋放,提取核酸后用于后續(xù)檢測,若無充分研磨可能會造成核酸檢測的假陰性結(jié)果。使用DHFSTPRP系列全自動樣品快速研磨機,升級了更強的動力,改進了研磨方式,樣本在全封閉狀態(tài)下裂解避免樣品間的交叉污染以及外界污染,在保證樣本安全的前提下使樣品研磨更充分、徹底,研磨效果穩(wěn)定;有多種規(guī)格適配器、研磨珠和研磨罐,可同時快速處理24-64個組織樣本,液晶顯示屏可儲存10條數(shù)據(jù)。更有DHFSTPRP-II系列液氮冷凍研磨機,真正的全自動冷凍研磨,低溫達到-196℃,可輕松處理熱敏感性樣本及難研磨樣本。
◆ 非洲豬瘟感染組織樣本核酸提?。?/strong>
TGuide S32自動核酸提取儀采用最新磁棒吸附轉(zhuǎn)移核酸純化方式,利用96深孔反應(yīng)板,搭配不同種類的磁珠法核酸提取試劑,同時操作1-32個樣本,從血液、細胞、組織、病毒等多種樣本中自動分離提取純化核酸。儀器通過特制的磁棒高效吸附、轉(zhuǎn)移和釋放磁珠,磁珠回收效率:≥98%,核酸得率更高;液體處理體積:20-1000μl,多檔可調(diào)振動速度,溶液體積自適應(yīng)振動幅度,振動幅度根據(jù)溶液體積自動調(diào)整保證裂解效果;配備交叉污染控制系統(tǒng)與紫外滅菌模塊,有效避免孔間及板間交叉污染;同時優(yōu)化加熱槽位設(shè)計,核酸回收體積更為準(zhǔn)確。
◆ 高敏及高特異性的熒光定量PCR檢測:儀器通過特制的磁棒高效吸附、轉(zhuǎn)移和釋放磁珠,磁珠回收效率:≥98%,核酸得率更高;液體處理體積:20-1000μl,多檔可調(diào)振動速度,溶液體積自適應(yīng)振動幅度,振動幅度根據(jù)溶液體積自動調(diào)整保證裂解效果;配備交叉污染控制系統(tǒng)與紫外滅菌模塊,有效避免孔間及板間交叉污染;同時優(yōu)化加熱槽位設(shè)計,核酸回收體積更為準(zhǔn)確。終點法PCR和實時熒光定量PCR均可以檢測PCR產(chǎn)物的量,從而推斷初始模板的含量。由于凝膠成像方法本身靈敏度的局限,實時熒光定量PCR熒光染料的加入,使儀器對于整個PCR反應(yīng)進行實時監(jiān)控,準(zhǔn)確性更高。
寧波中道非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒(B盒)是一款基于熒光探針的熒光定量檢測試劑盒,主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒(ASFV,African Swine Fever Virus)核酸,適用于非洲豬瘟病毒的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
試劑盒-20°進行保存,有限期為12個月,盒內(nèi)提供陰性及陽性對照,對于整個實驗進行質(zhì)量監(jiān)控。在第一批非洲豬瘟現(xiàn)場快速檢測試劑評價結(jié)果中,鄭州中道非洲豬瘟熒光定量PCR快速檢測試劑盒在診斷敏感性和診斷特異性上均表現(xiàn)優(yōu)異。
◆ 熒光定量檢測儀器:羅氏全能熒光定量PCR儀:
羅氏Light Cycler 96熒光定量PCR儀是全波長,高光強的PCR儀,高性價比,超長使用壽命,所有樣本同時檢測且高重復(fù)性,采用業(yè)內(nèi)獨有的光纖導(dǎo)光,避免光信號的損失;運用LightCycler 480上受好評的銀質(zhì)溫控模塊,導(dǎo)熱性快速均一,孔間溫控差異±0.2°,升溫速度4.4°/s,降溫速度2.2°/s,96孔檢測≤40min(35 Cyclers),較許多機型可節(jié)省一半的時間。Light Cycler 96可靈敏檢測單拷貝基因,拷貝數(shù)差異≤1.5倍,置信度≥99.8%,且無需無需ROX等被動染料校正,方便快捷性能穩(wěn)定。
◆ 小體系上樣操作工具:eppendorf移液器:
小貼士:
實時熒光定量PCR通常為小體系實驗,對于微量樣本來說特別是1-10ul上樣操作會出險移液吹打不凈現(xiàn)象,精準(zhǔn)移液是準(zhǔn)確結(jié)果的重要要素,因此推薦使用Eppendorf Reference2系列移液器搭配原裝進口吸頭進行移液操作和聯(lián)系昆騰戰(zhàn)隊工程師做移液操作專場講座,為結(jié)果的準(zhǔn)確性保駕護航。
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